服务简介：
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。
Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can lnduce Toxic Phenotype." RNA Accepted (2006)) 。他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1. 5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低，并且每条 siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同，反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说，Off-target 效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径， 其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19-23 nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11-15 nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。
如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的 基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期 的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target 效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。
而“RNA干扰回复实验”无疑是最佳的选择。
服务价格与周期：
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服务内容 |
服务周期 |
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材料准备:质粒形式 |
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shRNA 表达载体构建 |
2-3周 |
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目的基因 |
1周 |
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目的基因过表达载体构建 |
2-3周 |
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定点突变 |
2-3 周 |
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过表达NC对照 |
咨询 |
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转染级质粒大提（100ug）材料准备：腺病毒形式 |
1周 |
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腺病毒包装 |
4-5 周 |
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过表达NC 腺病毒对照(一般为rAd-EGFP) |
1-2 周 |
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RNA干扰回复实验 |
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细胞培养 |
1周 |
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细胞转染 |
1周 |
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腺病毒感染 |
1周 |
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RT-PCR 检测l |
1周 |
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Western-Blot |
1-2周 |
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MTT |
1周 |
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流式细胞检测 |
1周 |
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克隆形成实验 |
1-2周 |
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细胞小室实验 |
1-2周 |
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其它实验 |
咨询 |
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(注: 部分内容可选做。)
客户须知：
- 进行RNA干扰回复实验前，最好先通过预实验确定目的细胞的质粒转染效率。如目的细胞的质粒转染效率大于70% ，则可采用质粒形式载体；如目的细胞的质粒转染效率低于70% ，则建议采用腺病毒。如目的细胞的质粒转染效率低于70% ，而客户坚持使用质粒形式的载体进行实验，则本公司不保证实验结果；
- Western-Blot实验中，如一抗采用国产抗体，本公司不保证一定会获得正确结果；
- 本公司保证所提供的实验数据真实、准确，但不保证实验结果一定符合客户预期；
- 默认分组为：空白细胞组、RNA干扰组、RNA干扰+过表达(MT) 组、RNA干扰+过表达(NC) 组。如需加入RNA干扰NC对照，相应实验费用另计。