服务简介：
软件设计或者现有shRNA 库通常可以提供3-5条shRNA ，但是在RNA干扰主体实验中，一般用1-2条shRNA进行实验即可。因此，在进行RNA干扰主体实验之前，有必要进行有效shRNA的筛选，在3-5 条shRNA中筛选1-2条干扰效率最高的shRNA ，以进行后续实验。
如果目的细胞的质粒转染效率较高( 大于70%) ，则有效shRNA的筛选可以直接在日的细胞中进行，即所谓的"内源筛靶" 。而如果目的细胞的质粒转染效率一般(小于70%) ，则有效shRNA 的筛选可以在293 、CHO等工具细胞中进行，即所谓的"外源筛靶"。
无论是内源筛靶，还是外源筛靶，其基本步骤都包括:
- shRNA表达载体构建；
- 目的基因过表达载体构建( 内源筛靶可省293等工具细胞中如有目的基因的高表达，亦可省去此步骤)；
- 细胞培养及转染；
- RNA干扰效率检测(RT-PCR 、Westem-blot等)。
本公司根据以上服务内容，推出有效shRNA筛靶套餐，包括有效shRNA内源筛靶套餐(S2003) 、有效shRNA外源筛靶套餐(S2004) ，您可以根据需要订购相应的筛靶套餐。
TIPS :什么情况下选择外源筛靶？
- 目的细胞不易得到，例如原代细胞、稀有细胞株，或者目的细胞暂时还未到位；
- 目的细胞转染效率低(转染效率低于70%)；
- 目的细胞需要诱导才能表达靶基因；
- 目前尚无靶基因的抗体。
如果存在上述情况，您可以选择外源筛靶。选择外源筛靶时，有效shRNA的筛选通常在293 、CHO等工具细胞中进行。这些细胞培养容易、质粒转染效率高，是很好的研究平台。
如果293等工具细胞中有目的基因高表达，则可直接导入shRNA表达载体进行筛选。而如果293等细胞中目的基因表达量低，则需要额外共转染一个 目的基因的过表达载体，人为地创造一个目的基因高表达环境，以便于shRNA的筛选和验证。在表达目的基因时，还可以带入EGFP 、RFP等荧光标记，或者Flag 、Myc 、His等标 签，以便于后续RNA干扰效果的检测。
服务价格与周期:
一、有效shRNA 内源筛靶套餐(S2003)
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服务内容 |
服务价格(元) |
服务周期 |
|---|---|---|
|
预实验:确定目的细胞的质粒转染效率 |
免费 |
1 周 |
|
shRNA 表达载体构建( 默认为三条) |
1500 / 条( 三条套餐优惠价4000 ) |
2-3 周 |
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NC 对照 |
免费 |
现货 |
|
转染级质粒大提( 100μg ) |
200 ×4=800 |
1 周 |
|
细胞培养 |
150×5=750 |
1 周 |
|
细胞转染 |
50 ×5=250 |
1 周 |
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RT-PCR 检测 |
1500 |
1 周 |
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Western 一blot |
1500 (不含一抗，免费提供二抗) |
1-2 周 |
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共计 |
以三条计算，全套9000(不包括一抗购买费用) |
5-7 周 |
(注:部分内容可选做)
二、有效shRNA外源筛靶套餐(S2004)
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服务内容 |
服务价格(元) |
服务周期 |
|---|---|---|
|
预实验:确定目的细胞的质粒转染效率 |
免费 |
1 周 |
|
预实验293 等工具细胞中目的基因表达量 |
500 |
1 周 |
|
shRNA 表达载体构建(默认为三条) |
1500 /条(三条套餐优惠价4000) |
2~3 周 |
|
NC 对照 |
免费 |
现货 |
|
购买目的基因 |
1 500-2 000 |
1 周 |
|
目的基因过表达载体构建 |
1 500-2 000 |
2~3 周 |
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转染级质粒大提( 100 阳) |
200× 5=1000 |
1 周 |
|
细胞培养 |
150× 5=750 |
1 周 |
|
细胞转染 |
50×5=250 |
1 周 |
|
RT-PCR 检测 |
1500 |
1 周 |
|
Western一blot |
1500 (不含一抗，免费提供二抗) |
1~2 周 |
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共计 |
以三条计算，全套12000 (不包括一抗购买费用) |
5~7 周 |
(注:部分内容可选做)