慢病毒简介:
慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细 胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组 的儿率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。
所以，在体外实验及体内实验的研究中，慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一， 并且正在获得越来越广泛的应用。
慢病毒包装系统组成:
慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病 毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装， 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染。
现在的慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些，所以应用较多。
裴申生物慢病毒包装系统:
目前市面上常见的商业化慢病毒包装系统较多，其中常用的有Clontech 、Invitrogen 等公司的相关产品。裴申生物通过大量实验摸索，博采众家之长，建立起了一套稳定、可靠、高效的慢病毒包装系统。这套慢病毒包装系统， 其穿梭载体主要来自Clontech公司，包括以下载体：
|
载体名称 |
出品公司 |
用途 |
启动子 |
荧光标记 |
真核筛选标记 |
|---|---|---|---|---|---|
|
pLVX-DsRed-Monomer-Nl |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
DsRed-Monomer |
Puro |
|
pLVX-AcGFPI-N1 |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
AcGFP1 |
Puro |
|
pLVX-IRES-tdTomato |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
tdTomato |
无 |
|
pLVX-lRES-ZsGreen1 |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
ZsGreen1 |
无 |
|
pLVX-lRES-Neo |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
无 |
Neo |
|
pLVX-lRES-puro |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
无 |
Puro |
|
pLVX-ZsGreenl-Neo |
Yrbio |
表达miRNA |
CMV |
EGFP |
Neo |
|
pLVX-ZsGreenl-puro |
Yrbio |
表达miRNA |
CMV |
EGFP |
Puro |
|
pLVX-shRNA1 |
Clontech |
表达shRNA |
hU6 |
无 |
Puro |
|
pLVX-shRNA2 |
Clontech |
表达shRNA |
hU6 |
ZsGreen1 |
无 |
|
pLVX-shRNA3 |
Yrbio |
表达shRNA |
hU6 |
无 |
Neo |
|
pLVX-shRNA4 |
Yrbio |
表达shRNA |
hU6 |
ZsGreen1 |
Neo |
|
pLVX-shRNA5 |
Yrbio |
表达shRNA |
mU6 |
ZsGreen1 |
Neo |
|
pLVX-shRNA6 |
Yrbio |
表达shRNA |
h7SK |
ZsGreen1 |
Neo |
|
pLVX-shRNA7 |
Yrbio |
表达shRNA |
hH1 |
ZsGreen1 |
Neo |
您可以根据需要，选用合适的穿梭载体，用来装载目的基因或者目的shRNA 。在实际使用过程中，我们发现Clontech配套的慢病毒包装质粒不是很好用，出毒效率不高，所以， 我们采用了Invitrogen公司的惺病毒包装质粒来进行配套，其包括pLPl 、pLP2 、pLP/VSVG三个质粒。将这三个质粒与Clontech的慢病毒表达载体进行混合，导入293T包装细胞，能够高效地出毒。
慢病毒包装流程:
(一)表达基因用慢病毒包装流程:
|
实验步骤 |
服务描述 |
服务周期 |
|---|---|---|
|
1 |
客户选择目的基因、穿梭载体，Yrbio 负责实验设计 |
1 - 2 周 |
|
2 |
客户提供目的基因，或从Yrbio 基因库中购买该基因 |
1周 |
|
3 |
将目的基因的CDS 区构建至穿梭载体上 |
2 - 3 周 |
|
4 |
慢病毒包装、出毒、扩增 |
3 - 4 周 |
(二)表达shRNA 用慢病毒包装流程:
|
实验步骤 |
服务描述 |
服务周期 |
|---|---|---|
|
1 |
客户选择靶基因或目的shRNA、穿梭载体， Yrbio 负责实验设计 |
1 - 2 周 |
|
2 |
将目的shRNA 构建至穿梭载体上 |
2 - 3 周 |
|
3 |
有效shRNA 筛选( 筛靶套餐，保证至少一条shRNA有效，可选) |
3 - 4 周 |
|
4 |
慢病毒包装、出毒、扩增 |
3 - 4 周 |
慢病毒包装价格及周期:
|
表达基因或shRNA |
滴度 |
价格 |
周期 |
|
表达基因（<2K） |
1x108 TU |
7000元 |
3~4周 |
|
2x108 TU |
12000元 |
3~4周 |
|
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
|
表达基因（2K~2.5K） |
1x108 TU |
7500元 |
3~4周 |
|
2x108 TU |
13000元 |
3~4周 |
|
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
|
表达基因（2.5K~3K） |
1x108 TU |
8000元 |
3~4周 |
|
2x108 TU |
15000元 |
3~4周 |
|
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
|
表达基因（>3K） |
5~7周 |
||
|
表达shRNA （单条） |
1x108 TU |
4000元 |
3~4周 |
|
2x108 TU |
7000元 |
3~4周 |
|
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
|
表达shRNA （三条，保证至少一条有效） |
1x108 TU |
12000元 |
3~4周 |
|
更高滴度 |
3~4周 |
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慢病毒对照价格及周期:
|
服务内容 |
滴度 |
服务周期 |
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|---|---|---|---|
|
Lv-AcGFP1 (表达基因用对照) (绿色荧光) |
l x108TU |
3-4 周 |
|
|
2x108TU |
3-4 周 |
||
|
更高滴度 |
3-4 周 |
||
|
Lv--ZsGreen1 (表达基因用对照) (绿色荧光) |
l x108TU |
现货 |
|
|
2x108TU |
现货 |
||
|
更高滴度 |
3-4 周 |
||
|
Lv—DsRed-Monomer (表达基因用对照) (红色荧光) |
l x108TU |
3-4 周 |
|
|
2x108TU |
3-4 周 |
||
|
更高滴度 |
3-4 周 |
||
|
Lv-tdTomato (表达基因用对照) (红色荧光) |
l x108TU |
现货 |
|
|
2x108TU |
现货 |
||
|
更高滴度 |
3-4 周 |
||
|
Lv-NC-shRNA (表达shRNA用对照) (绿色荧光) |
l x108TU |
现货 |
|
|
2x108TU |
现货 |
||
|
更高滴度 |
3-4 周 |
注: 由于慢病毒对照产品销售或使用频繁，有时不一定有现货，订购前请先咨询
客户须知:
- 上述价格均不包括运输费用。如果您需要干冰运输，按照50元/公斤干冰计算，一般需要加10公斤干冰，即干冰运输费用在500元左右。如果您同意采用超低温冰袋运输，则运输费用为50元。我们将采用快递寄送，全国大部分城市隔天到货。
- 如客户所需包装的目的基因由客户提供，则客户应提供所要构建慢病毒的目的基因的序列及其它相关说明信息（例如装载载体、质粒图谱、酶切位点等）。客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
- 如客户订购基因过表达的慢病毒，我们承诺交付的慢病毒的滴度不低于107TU/ml，如果低于此滴度，我们将免费重包。如果重包还是达不到要求，我们将做退单处理，客户不需支付任何费用。我们会尽量提供高滴度的慢病毒产品，但考虑到慢病毒包装对外源表达框的限制，外源表达框较大时，出毒滴度会受到较大影响，因此，如出毒滴度介于107TU/ml和108TU/ml之间，我们将按实际滴度出货。表达shRNA的慢病毒，出毒滴度一般都可以达到108TU/ml。
- 如shRNA序列由客户提供，则本公司只负责证明包含有该shRNA序列的慢病毒构建成功，而不对其干扰效率做任何保证。
- 如客户需委托本公司使用包装好的慢病毒感染目的细胞，建立稳定表达目的基因或目的shRNA的细胞系，则相关实验费用另外计算。